美國Liposoma B.V.公司中國總代理商

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螞蟻淘獲得Liposoma B.V.授權(quán)銷售氯膦酸鹽脂質(zhì)體Clodronate liposomes



Liposoma BV由Asha van Rooijen于2013年創(chuàng)立。我們公司提供脂質(zhì)體制劑，特別是氯膦酸鹽脂質(zhì)體，對照（PBS）脂質(zhì)體和熒光DiI和DiO脂質(zhì)體。
我們的專家和支持團(tuán)隊(duì)成功地為數(shù)千個(gè)研究組服務(wù)，研究各種自身免疫性疾病，移植，神經(jīng)系統(tǒng)疾病和基因治療模式。
Liposoma得到Nico van Rooijen的支持，他開發(fā)了氯膦酸鹽脂質(zhì)體，并且在氯膦酸鹽脂質(zhì)體的應(yīng)用咨詢方面擁有豐富的知識和經(jīng)驗(yàn)。
憑借30多年開發(fā)各種脂質(zhì)體制劑的經(jīng)驗(yàn)，我們以比競爭對手更低的成本提供高質(zhì)量的產(chǎn)品。我們在開發(fā)脂質(zhì)體配方方面的豐富知識使我們能夠在實(shí)驗(yàn)過程中有效地向我們的客戶咨詢我們的產(chǎn)品，并積極開展研發(fā)項(xiàng)目，以開發(fā)新的脂質(zhì)體配方，以改善和擴(kuò)大我們客戶的研究機(jī)會(huì)。
目前國內(nèi)的北京大學(xué)、交通大學(xué)、華東師范大學(xué)和香港城市大學(xué)都有使用Liposoma BV公司的Clodronate liposomes進(jìn)行相關(guān)研究。
Clodronate liposomes巨噬細(xì)胞清除去除巨噬細(xì)胞（depletion of macrophages）是研究巨噬細(xì)胞功能的重要方法。荷蘭阿姆斯特丹Vrije University 的Nico van Rooijen教授開發(fā)的一款Clodronate liposomes，可以利用巨噬細(xì)胞的內(nèi)吞機(jī)制，將膜不通透性的氯磷酸（Clodronate）帶入細(xì)胞內(nèi)，從而達(dá)到去除巨噬細(xì)胞的目的。
作用原理：
兩親性磷脂分子在水中可以形成同心圓形式的磷脂雙分子層球體，磷脂雙分子層中間通過水相分隔。溶解在水溶液中的氯磷酸鹽在形成脂質(zhì)體的過程中被包裹進(jìn)磷脂雙分子層之間的水相中（如圖1）。游離的氯磷酸鹽不能自由的通過脂質(zhì)體的磷脂雙分子層。隨著脂質(zhì)體被巨噬細(xì)胞吞噬，在巨噬細(xì)胞溶酶體磷酸酶的作用下，溶解在脂質(zhì)體水相中的氯磷酸鹽就可以被逐步釋放出來，并累積在細(xì)胞內(nèi)，當(dāng)其達(dá)到一定濃度時(shí)，巨噬細(xì)胞將會(huì)受到不可逆轉(zhuǎn)的損傷，從而進(jìn)入凋亡過程（如圖2）。從死亡的巨噬細(xì)胞中釋放出來的氯磷酸鹽在細(xì)胞外的半衰期極短（大約15min），可以通過泌尿系統(tǒng)排除體外。

圖1：氯磷酸-脂質(zhì)體（Clodronate liposomes）復(fù)合物。在脂質(zhì)體的形成過程中氯磷酸通過溶解在水溶液中被包裹進(jìn)磷脂雙分子層之間的水相中。

圖2：巨噬細(xì)胞清除原理。包裹著氯磷酸（方塊）的脂質(zhì)體通過巨噬細(xì)胞的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，與溶酶體（L）融合后，在磷脂酶(箭頭)的作用下，釋放出氯磷酸，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)氯磷酸的濃度達(dá)到一定濃度，就會(huì)對巨噬細(xì)胞造成不可逆轉(zhuǎn)的損害，從而迫使其進(jìn)入細(xì)胞凋亡。
產(chǎn)品性質(zhì)：
1ml脂質(zhì)體體懸液中所含的氯磷酸大約為5mg。所用的磷酸鹽緩沖液為10 mM Na2HPO4，10 mM NaH2PO4，140 mM NaCl。
脂質(zhì)體體內(nèi)注射：
隔日尾靜脈注射200μl Clodronate liposome，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制定注射日程。通過免疫組化或流式檢測巨噬細(xì)胞去除效率。
尾靜脈注射方法：
（1）將小鼠放在倒扣的飯盒內(nèi)，從孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2條動(dòng)脈和3條靜脈，2條動(dòng)脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面，3條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩側(cè)的靜脈；
（2）將紗布浸泡于約70度的溫水中，拿出后包裹尾巴，以達(dá)到使尾部血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的；
（3）行尾部靜脈注射時(shí)，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出約2cm一段，使皮膚緊張，靜脈更為充盈，右手持1ml針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于30°角)，從尾巴的下1/4處進(jìn)針，開始注入藥物時(shí)應(yīng)緩慢，仔細(xì)觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，說明已刺入血管，可正式注入藥物。
（4）有的實(shí)驗(yàn)需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥，注射部位應(yīng)盡可能從尾端開始，按次序向尾根部移動(dòng)，更換血管位置注射給藥。拔出針頭后，用棉球按住注射部位輕壓1-2min，止血。
效果展示：
案例一：
案例二：
左圖顯示的是正常脾臟細(xì)胞中陽性巨噬細(xì)胞的染色結(jié)果。右圖為Clodronate-liposome注射2天后觀察的結(jié)果，可以發(fā)現(xiàn)只剩下少量的巨噬細(xì)胞。
左圖表示正常肝臟細(xì)胞中陽性的Kupffer細(xì)胞。右圖表示Clodronate-liposomes注射2天后，肝臟Kupffer細(xì)胞染色結(jié)果，Kupffer細(xì)胞基本被清除。
 
FAQ:
Q:收到Clodronate liposomes后該如何操作？
A:收到氯磷酸脂質(zhì)體后，如果不能馬上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止凍存！使用時(shí)作為原液使用，不能進(jìn)行稀釋。脂質(zhì)體很容易發(fā)生沉淀，建議使用之前輕輕混勻，另外4℃的氯磷酸脂質(zhì)體不能馬上使用，需要恢復(fù)到室溫才能進(jìn)行注射。
Q: Clodronate liposomes能否用于體外巨噬細(xì)胞清除？
A:產(chǎn)品可以用于體外巨噬細(xì)胞的清除，但是這種方法比較適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。主要是由于在體外培養(yǎng)過程中，從死亡細(xì)胞釋放的氯磷酸或者是從脂質(zhì)體中“滲漏”出來氯磷酸，會(huì)一直存在于培養(yǎng)基中，但是在體內(nèi)，氯磷酸的半衰期很短，很快就會(huì)被腎臟清除。雖然游離的氯磷酸不會(huì)進(jìn)入細(xì)胞也不會(huì)進(jìn)入脂質(zhì)體，但是一旦他們在培養(yǎng)基中積累就會(huì)慢慢地進(jìn)入細(xì)胞中。
Q:在靜脈注射Clodronate liposomes后動(dòng)物很快就死亡了，是什么原因？
A:一方面有可能是動(dòng)物注射了不均一的脂質(zhì)體懸液。建議在使用之前輕輕搖晃混勻。脂質(zhì)體在體外一段時(shí)間后會(huì)發(fā)生沉降。如果在很長一段時(shí)間內(nèi)需要一次注射多只動(dòng)物，那么脂質(zhì)體便會(huì)在注射器中發(fā)生沉淀，形成不均一懸液，這樣一來，*只注射的計(jì)量與zui后一只注射的計(jì)量就會(huì)發(fā)生明顯的變化。另外一方面有可能是脂質(zhì)體剛從冰箱取出后，沒有恢復(fù)到室溫。
Q:動(dòng)物在注射Clodronate liposomes后幾天就死亡了？
A：這個(gè)可能是受到細(xì)菌的污染，體內(nèi)清除巨噬細(xì)胞后會(huì)增加例如病毒粒子，細(xì)菌或者酵母感染的幾率。
Q:靜脈注射Clodronate liposomes后大鼠脾臟/肝臟中的ED1+細(xì)胞并沒有*消失？
A：大鼠中成熟的巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)ED1和ED2雙陽性，但是有一些沒有吞噬功能的或者吞噬作用小的前體細(xì)胞也是ED1+，但是呈現(xiàn)ED2-。因此，所有ED2+的細(xì)胞都可以被*清除，但是ED1+的細(xì)胞卻只能被部分清除，清除的比率取決于前體/成熟巨噬細(xì)胞的比例。
Q: Clodronate liposomes沒有達(dá)到期望的效果？
A：氯磷酸脂質(zhì)體都是大批量的生產(chǎn)，每批次都會(huì)對氯磷酸的濃度以及一些可能的污染物進(jìn)行檢測，確保無誤后才會(huì)銷售給客戶。另外，脂質(zhì)體容易收到溫度的影響。正確的運(yùn)輸和儲(chǔ)存方式是4~8℃，懸液既不能被凍存，也不能被加熱超過30℃。自收到貨物起，需要在3個(gè)月內(nèi)使用完，不然有可能會(huì)影響使用的效果。
Q:在靜脈注射時(shí)，能不能增加注射的體積？
A：靜脈注射時(shí)需要依據(jù)動(dòng)物的體重，不能超過0.1ml/10mg，但是進(jìn)行腹腔注射可以適當(dāng)?shù)脑黾幼⑸涞捏w積。皮下注射需要根據(jù)注射位點(diǎn)的容量進(jìn)行決定。

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 產(chǎn)品性質(zhì)：1ml脂質(zhì)體體懸液中所含的氯磷酸大約為5mg。所用的磷酸鹽緩沖液為10 mM Na2HPO4，10 mM NaH2PO4，140 mM NaCl。脂質(zhì)體體內(nèi)注射：隔日尾靜脈注射200μl Clodronate liposome，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求制定注射日程。通過免疫組化或流式檢測巨噬細(xì)胞去除效率。尾靜脈注射方法：（1）將小鼠放在倒扣的飯盒內(nèi)，從孔口拉出尾巴，小鼠的尾部有2條動(dòng)脈和3條靜脈，2條動(dòng)脈分別在尾部的背側(cè)面和腹側(cè)面，3條靜脈呈品字型分布,一般采用左右兩側(cè)的靜脈；（2）將紗布浸泡于約70度的溫水中，拿出后包裹尾巴，以達(dá)到使尾部血管擴(kuò)張及軟化表皮角質(zhì)的目的；（3）行尾部靜脈注射時(shí)，以左手拇指和食指前后摁住鼠尾，留出約2cm一段，使皮膚緊張，靜脈更為充盈，右手持1ml針頭注射器，使針頭與靜脈平行(小于30°角)，從尾巴的下1/4處進(jìn)針，開始注入藥物時(shí)應(yīng)緩慢，仔細(xì)觀察，如果無阻力，無白色皮丘出現(xiàn)，說明已刺入血管，可正式注入藥物。（4）有的實(shí)驗(yàn)需連日反復(fù)尾靜脈注射給藥，注射部位應(yīng)盡可能從尾端開始，按次序向尾根部移動(dòng)，更換血管位置注射給藥。拔出針頭后，用棉球按住注射部位輕壓1-2min，止血。FAQ:Q:收到Clodronate liposomes后該如何操作？A:收到氯磷酸脂質(zhì)體后，如果不能馬上使用，需要放置在4℃冰箱。禁止凍存！使用時(shí)作為原液使用，不能進(jìn)行稀釋。脂質(zhì)體很容易發(fā)生沉淀，建議使用之前輕輕混勻，另外4℃的氯磷酸脂質(zhì)體不能馬上使用，需要恢復(fù)到室溫才能進(jìn)行注射。Q: Clodronate liposomes能否用于體外巨噬細(xì)胞清除？A:產(chǎn)品可以用于體外巨噬細(xì)胞的清除，但是這種方法比較適合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。主要是由于在體外培養(yǎng)過程中，從死亡細(xì)胞釋放的氯磷酸或者是從脂質(zhì)體中“滲漏”出來氯磷酸，會(huì)一直存在于培養(yǎng)基中，但是在體內(nèi)，氯磷酸的半衰期很短，很快就會(huì)被腎臟清除。雖然游離的氯磷酸不會(huì)進(jìn)入細(xì)胞也不會(huì)進(jìn)入脂質(zhì)體，但是一旦他們在培養(yǎng)基中積累就會(huì)慢慢地進(jìn)入細(xì)胞中。Q:在靜脈注射Clodronate liposomes后動(dòng)物很快就死亡了，是什么原因？A:一方面有可能是動(dòng)物注射了不均一的脂質(zhì)體懸液。建議在使用之前輕輕搖晃混勻。脂質(zhì)體在體外一段時(shí)間后會(huì)發(fā)生沉降。如果在很長一段時(shí)間內(nèi)需要一次注射多只動(dòng)物，那么脂質(zhì)體便會(huì)在注射器中發(fā)生沉淀，形成不均一懸液，這樣一來，*只注射的計(jì)量與zui后一只注射的計(jì)量就會(huì)發(fā)生明顯的變化。另外一方面有可能是脂質(zhì)體剛從冰箱取出后，沒有恢復(fù)到室溫。Q:動(dòng)物在注射Clodronate liposomes后幾天就死亡了？A：這個(gè)可能是受到細(xì)菌的污染，體內(nèi)清除巨噬細(xì)胞后會(huì)增加例如病毒粒子，細(xì)菌或者酵母感染的幾率。Q:靜脈注射Clodronate liposomes后大鼠脾臟/肝臟中的ED1+細(xì)胞并沒有*消失？A：大鼠中成熟的巨噬細(xì)胞呈現(xiàn)ED1和ED2雙陽性，但是有一些沒有吞噬功能的或者吞噬作用小的前體細(xì)胞也是ED1+，但是呈現(xiàn)ED2-。因此，所有ED2+的細(xì)胞都可以被*清除，但是ED1+的細(xì)胞卻只能被部分清除，清除的比率取決于前體/成熟巨噬細(xì)胞的比例。Q: Clodronate liposomes沒有達(dá)到期望的效果？A：氯磷酸脂質(zhì)體都是大批量的生產(chǎn)，每批次都會(huì)對氯磷酸的濃度以及一些可能的污染物進(jìn)行檢測，確保無誤后才會(huì)銷售給客戶。另外，脂質(zhì)體容易收到溫度的影響。正確的運(yùn)輸和儲(chǔ)存方式是4~8℃，懸液既不能被凍存，也不能被加熱超過30℃。自收到貨物起，需要在3個(gè)月內(nèi)使用完，不然有可能會(huì)影響使用的效果。Q:在靜脈注射時(shí)，能不能增加注射的體積？A：靜脈注射時(shí)需要依據(jù)動(dòng)物的體重，不能超過0.1ml/10mg，但是進(jìn)行腹腔注射可以適當(dāng)?shù)脑黾幼⑸涞捏w積。皮下注射需要根據(jù)注射位點(diǎn)的容量進(jìn)行決定。